mousec---kit-纽斯特

对于生长的组织培养液中的细胞，首先移除培养基，然后加入0.1m hcl处理细胞。孵育10分钟并观察细胞是否被裂解；如果裂解不充分，接着孵育10分钟并观察。以大于600g离心力于室温离心，收集上清直接用于实验。临用前在0.1m hcl中加入0.1%至1%浓度的triton-x 100可增强细胞和组织裂解。在这个浓度范围内，去污剂并不干扰试验的结合部位，但是会适度的增加光密度值。含有triton的样品需利用标准曲线估计浓度，为了较精l确的测定，标准曲线需以相同方式稀释。取1 ml细胞培养上清加入10μl浓---，600g离心力于室温离心，上清液直接用于实验测定分析。

本试剂盒利用竞争酶联免l疫分析方法来测定细胞提取物或体外腺苷酸环化酶实验中的camp的水平。简而言之，将羊抗鼠多克l隆抗l体包被在酶标板上，mousec---kit，细胞提取物或体外腺苷酸环化酶实验中的camp与固定数量的偶联辣根---化物酶的camp或碱性磷酸酶竞争性的结合抗camp单克l隆抗l体，已知的camp作为标准品来做标准曲线。经过一段时间孵育，洗掉所有试剂，加入底物进行显色。将多孔板置于酶标l仪上，于450nm或405nm波长下，进行读数。黄色的光强度与样品中camp的浓度呈反比关系。基于camp标准品所得曲线，通过测得的光密度可以计算出样品中camp的浓度。