c--- elisakit-纽斯特生物技术

本试剂盒利用竞争酶联免l疫分析方法来测定细胞提取物或体外腺苷酸环化酶实验中的camp的水平。简而言之，c--- elisakit，将羊抗鼠多克l隆抗l体包被在酶标板上，细胞提取物或体外腺苷酸环化酶实验中的camp与固定数量的偶联辣根---化物酶的camp或碱性磷酸酶竞争性的结合抗camp单克l隆抗l体，已知的camp作为标准品来做标准曲线。经过一段时间孵育，洗掉所有试剂，加入底物进行显色。将多孔板置于酶标l仪上，于450nm或405nm波长下，进行读数。黄色的光强度与样品中camp的浓度呈反比关系。基于camp标准品所得曲线，通过测得的光密度可以计算出样品中camp的浓度。

实验步骤

使用前将各种试剂取出放置30分钟，平衡至室温。所有标准品和样品必需设置平行对照实验。

快速加入试剂至样品中，立即漩涡震荡2秒混匀。

1. 依据实验键盘纸决定酶标条的使用量，将剩余的酶标条连同干燥剂一起放回密封塑料袋，密封，4℃保存。

2. 移取50μl中和液至各个微孔中，除了ta(全活性)孔和blank(空白)孔。

3. 移取100μl 0.1m hcl至nsb(非特异结合)孔和b0孔(0 pmol/ml camp标准品)。

4. 移取100μl camp标准品至相应的孔。

5. 移取100μl样品至相应的孔。

6. 移取50μl 0.1m hcl至nsb(非特异结合)孔。7. 移取50μl 偶联酶至各孔中，除了ta(全活性)孔和blank(空白)孔。

8. 移取50μl 抗l体工作液至各孔中，除了ta(全活性)孔、blank(空白)孔和nsb(非特异结合)孔。

9. 将酶标孔置于孔板振动器上，250~500rpm，室温孵育2小时。

10. 在吸水纸上拍干微孔内溶液，加洗涤液400μl每孔洗3次，每次需拍干。

11. 后一次洗涤，清空各微孔，在干净的无尘吸水纸上轻巧酶标板数次，以---没有洗涤液残留。

12. 加5μl 偶联酶至ta(全活性)孔。

13. 每孔200μl显色底物溶液，于室温静置5~30分钟。（显色底物a和b需在临用前15分钟内等体积混合，并避光放置。）

14. 每孔加入50μl终止液。终止后立即读数。

15. 清除酶标l仪blank(空白)孔值，读取450nm处的光密度值，在570nm至590nm之间有修正。如果酶标l仪不能自动清除blank(空白)孔值，那么手动扣除每个读数的blank(空白)孔光密度值。