武汉纽斯特生物科技有限公司(wuhanneweastbiotechonologyco.ltd),系美国生命科学试剂供应商美国neweastbio在的子公司。公司位于武汉东湖---开发区光谷生物城.美国neweastbio---于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、elisa试剂盒、蛋白等,与高校和研究所、大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系,产品销往全球。
非---化c---标准品将5000 pmol/ml c---标准品溶液平衡至室温。从#1至#7标记六只洁净试管。移取475μl 0.1m hcl到#1号试管,400μl到#2至#7号试管。加入25μl 5000 pmol/ml c---标准品到#1管中,剧烈涡旋震荡。从#1管中取出100μl溶液至#2管中,涡旋震荡。以此类推,重复上步操作,梯度稀释至#7管。
经以上操作,#1至#6管中c---标准品浓度分别为250,50,10,2,0.4,0.08和0.016 pmol/ml(详见c---加样表)。稀释过的标准品需在30分钟内使用。
标记一只试管作为无标准品空白对照(nsb)。移取600μl 0.1m hcl到nsb管中。
洗涤液将15 ml 10×洗涤液储液加到135 ml去离子水中,稀释成工作液。稀释液可在室温保存至试剂盒有效期限,或者3个月。
武汉纽斯特生物科技有限公司(wuhanneweastbiotechonologyco.ltd),系美国生命科学试剂供应商美国neweastbio在的子公司。公司位于武汉东湖---开发区光谷生物城.美国neweastbio---于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、elisa试剂盒、蛋白等,与高校和研究所、大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系,camp kit,产品销往全球。
体外用gtpγs/gdp处理蛋白以用作阳性和阴性的对照
注意:在细胞体内环境条件下大约有10%的ras被激l活,而在体外用gtpγs处理大约有90%的ras被激l活。
1.
准备两个离心管,每个管中各加入0.5 ml的细胞提取物(如果是纯的ras蛋白则每个管中加入的蛋白量为1ug)。
2.
每个管中加入20ul 0.5m edta(终浓度即为20 mm)。
3.
一个管中加入5ul的100x gtpγs(终浓度即为100 um)作为阳性对照。另一个管中加入5ul的100x gdp(终浓度即为1 mm)作为阴性对照。
4.
将离心管置于30°c条件下反应30 min并不断搅动。
5.
终止反应:将管置于冰上并加入32.5ul 1m mgcl2(终浓度即为60mm)。
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