对于生长的组织培养液中的细胞,首先移除培养基,然后加入0.1m hcl处理细胞。孵育10分钟并观察细胞是否被裂解;如果裂解不充分,接着孵育10分钟并观察。以大于600g离心力于室温离心,收集上清直接用于实验。临用前在0.1m hcl中加入0.1%至1%浓度的triton-x 100可增强细胞和组织裂解。在这个浓度范围内,去污剂并不干扰试验的结合部位,但是会适度的增加光密度值。含有triton的样品需利用标准曲线估计浓度,为了较精l确的测定,标准曲线需以相同方式稀释。取1 ml细胞培养上清加入10μl浓---,600g离心力于室温离心,上清液直接用于实验测定分析。
武汉纽斯特生物科技有限公司(wuhanneweastbiotechonologyco.ltd),系美国生命科学试剂供应商美国neweastbio在的子公司。公司位于武汉东湖---开发区光谷生物城.美国neweastbio---于生命科学和生物技术领域,人环磷酸腺苷 camp elisa,主要产品有小分子、elisa试剂盒、蛋白等,与高校和研究所、大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系,产品销往全球。
体外用gtpγs/gdp处理蛋白以用作阳性和阴性的对照
注意:在细胞体内环境条件下大约有10%的ras被激l活,而在体外用gtpγs处理大约有90%的ras被激l活。
1.
准备两个离心管,每个管中各加入0.5 ml的细胞提取物(如果是纯的ras蛋白则每个管中加入的蛋白量为1ug)。
2.
每个管中加入20ul 0.5m edta(终浓度即为20 mm)。
3.
一个管中加入5ul的100x gtpγs(终浓度即为100 um)作为阳性对照。另一个管中加入5ul的100x gdp(终浓度即为1 mm)作为阴性对照。
4.
将离心管置于30°c条件下反应30 min并不断搅动。
5.
终止反应:将管置于冰上并加入32.5ul 1m mgcl2(终浓度即为60mm)。
武汉纽斯特生物科技有限公司(wuhanneweastbiotechonologyco.ltd),系美国生命科学试剂供应商美国neweastbio在的子公司。公司位于武汉东湖---开发区光谷生物城.美国neweastbio---于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、elisa试剂盒、蛋白等。
一、高l效、灵敏、特异的抗l体;二、稳定的重复性和---性;三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;四、适用血l清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;五、节省实验经费。
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