武汉纽斯特生物技术-rab5-gtp

产品描述

arf样蛋白1（arl1）是调节性gtpase家族中的一员，位于ras中gtpases的超家族，在真核生物中具有高度保守的同源基因。arl1---用于果蝇和秀丽隐杆线虫的早期胚胎发育。arl1在一级序列，细胞位置和功能（膜交通的调节）到arf1–6甚至共享几个共同的有约束力的合作伙伴。除了在膜交通中的作用高尔基/跨高尔基网络，有---表明arl1可能在离子稳态中起作用酵母。

电泳和转膜

1. 取15ul样品/孔上样17%配体胶。

2. 按照制造商的说明进行sds-page。

3. 按照制造商的说明将凝胶蛋白转到pvdf或硝化纤l维素膜。

免l疫印迹反应和检测（所有步骤都是在室温下进行，并不断搅拌）

1. 将pvdf膜浸入100%甲l醇15s，然后在室温放置5 min晾干。

注意：如果使用的是硝化纤l维素膜，此步省略。

2. 封闭：用tbst缓冲液配制5%的脱脂牛奶或者3%bsa在室温下孵育1h进行封闭，并需要恒定振荡。

3. 孵育一抗：用tbst缓冲液配制的5%脱脂牛奶或3%bsa稀释特---识别cdc42活性构象的兔多克l隆抗l体（稀释比例为1:50-1:1000，主要根据样品中含有的cdc42蛋白的量），室温下孵育1-2小时，或者4°c条件下过夜孵育。

4. 用tbst缓冲液洗涤膜三次/5min。

5. 孵育二抗：（例如羊抗兔igg-hrp），用tbst缓冲液配制的5%脱脂牛奶或3%bsa按1:1000稀释比例稀释后使用，室温下孵育1小时并恒定振荡。

6. 用tbst缓冲液洗涤膜三次/5min。

7. 使用实验者所选择的检测方法进行显色如ecl显色法。