电泳和转移
1向聚丙l烯---凝胶（17%）中加入15μl/孔的下拉上清液。而且
2按照制造商的说明进行sds-page。
3按照制造商的说明，将凝胶蛋白转移到pvdf或硝化纤维膜上
免l疫印迹检测（所有步骤均在室温下搅拌）
1在电印迹步骤之后，将pvdf膜浸入100%甲l醇中15次
然后在室温下干燥5分钟。
如果使用---纤维素，则应跳过此步骤。
2室温下用5%脱脂奶粉或3%牛血l清白蛋白在tbst中封闭1小时
不断地搅动。
用抗arl1单克l隆抗l体孵育，新鲜稀释1:50~1000
（取决于样品中arl1蛋白质的含量）5%脱脂奶粉或3%
bsa/tbst，室温下持续搅拌1-2小时或4o
过夜。
3用tbst清洗吸水膜三次，每次5分钟。
4用二级抗l体（例如山羊抗鼠igg，hrp结合物）培养膜，
在室温下，在5%脱脂奶粉或3%bsa/tbst中新鲜稀释1:1000，1小时
不断地搅动。
5用tbst清洗吸水膜三次，每次5分钟。
6使用您选择的检测方法，如ecl。
电泳和转膜
1. 取15ul样品/孔上样17%配体胶。
2. 按照制造商的说明进行sds-page。
3. 按照制造商的说明将凝胶蛋白转到pvdf或硝化纤l维素膜。
免l疫印迹反应和检测（所有步骤都是在室温下进行，并不断搅拌）
1. 将pvdf膜浸入100%甲l醇15s，然后在室温放置5 min晾干。
注意：如果使用的是硝化纤l维素膜，此步省略。
2. 封闭：用tbst缓冲液配制5%的脱脂牛奶或者3%bsa在室温下孵育1h进行封闭，并需要恒定振荡。
3. 孵育一抗：用tbst缓冲液配制的5%脱脂牛奶或3%bsa稀释特---识别cdc42活性构象的兔多克l隆抗l体（稀释比例为1:50-1:1000，主要根据样品中含有的cdc42蛋白的量），室温下孵育1-2小时，或者4°c条件下过夜孵育。
4. 用tbst缓冲液洗涤膜三次/5min。
5. 孵育二抗：（例如羊抗兔igg-hrp），用tbst缓冲液配制的5%脱脂牛奶或3%bsa按1:1000稀释比例稀释后使用，重组人rab5c 蛋白，室温下孵育1小时并恒定振荡。
6. 用tbst缓冲液洗涤膜三次/5min。
7. 使用实验者所选择的检测方法进行显色如ecl显色法。
武汉纽斯特生物科技有限公司（wuhanneweastbiotechonologyco.ltd），系美国生命科学试剂供应商美国neweastbio在的子公司。公司位于武汉东湖---开发区光谷生物城.美国neweastbio---于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、elisa试剂盒、蛋白等，与高校和研究所、大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系，产品销往全球。
电泳与转移
1.将15 μl /孔的下拉上清液加到聚丙l烯---凝胶（17％）中。 而且，
2.按照制造商的说明执行sds-page。
3.按照制造商的说明将凝胶蛋白转移到pvdf或硝l酸纤维素膜上。
武汉纽斯特公司(多图)-重组人rab5c 蛋白由武汉纽斯特生物技术有限公司提供。武汉纽斯特生物技术有限公司位于湖北省武汉市东湖新技术开发区高新大道666号光谷生物城b3-3栋3楼。在市场经济的浪潮中拼博和发展，目前武汉纽斯特在生物化工中享有---的声誉。武汉纽斯特取得商盟，我们的服务和管理水平也达到了一个新的高度。武汉纽斯特全体员工愿与各界有识之士共同发展，共创美好未来。
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