体外用gtpγs/gdp处理蛋白以用作阳性和阴性的对照
注意：在细胞体内环境条件下大约有10%的cdc42被激l活，而在体外用gtpγs处理大约有90%的cdc42被激l活。
1. 准备两个离心管，每个管中各加入0.5 ml的细胞提取物（如果是纯的cdc42蛋白则每个管中加入的蛋白量为1ug）。
2. 每个管中加入20ul 0.5m edta(终浓度即为20 mm)。
3. 一个管中加入5ul的100x gtpγs（终浓度即为100 um）作为阳性对照。另一个管中加入5ul的100x gdp（终浓度即为1 mm）作为阴性对照。
4. 将离心管置于30°c条件下反应30min并不断搅动。
5. 终止反应：将管置于冰上并加入32.5ul 1m mgcl2(终浓度即为60mm)。
arf样蛋白1（arl1）是gtpases的ras超家族中的调控性gtpases arf家族的成员，并且在整个真核生物中都具有高度保守的直系同源基因。 arl1对果蝇和秀丽隐杆线虫的早期胚胎发育---。 arl1在主要序列，细胞定位和功能（膜运输调节）上与arf1-6较相似，甚至共享几个共同的结合伴侣。 除了其在高尔基体/反式高尔基体网络中的膜运输功能中，还有---表明arl1在酵母中的离子稳态中可能发挥作用。
arf6激l活测定。 经gdp（lane1）或gtpγs（lane 2）处理后，纯化的arf6蛋白被免l疫沉淀。 用抗活性arf6单克l隆抗l体进行免l疫沉淀。
分析原理
neweast biosciences arl1激l活检测试剂盒基于配置特---抗arl1-gtp
需要但未提供的材料
1---性和非---性细胞裂解物
2蛋白酶抑制素
4°c摇管器或振动筛
40.5 m edta，ip-wb活性检测试剂盒，ph8.0
51百万氯---
62x还原sds-page样品缓冲液
7电泳和免l疫印迹系统
8免l疫印迹洗涤缓冲液，如tbst（10 mm tris hcl，ph 7.4，0.15 m nacl，0.05%
吐温-20）
9免l疫印迹阻断缓冲液（含5%脱脂奶粉或3%牛血l清白蛋白的tbst）
10pvdf或硝化纤维膜
11次级抗l体
12ecl检测试剂
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