对于生长的组织培养液中的细胞,首先移除培养基,camp assaykit,然后加入0.1m hcl处理细胞。孵育10分钟并观察细胞是否被裂解;如果裂解不充分,接着孵育10分钟并观察。以大于600g离心力于室温离心,收集上清直接用于实验。临用前在0.1m hcl中加入0.1%至1%浓度的triton-x 100可增强细胞和组织裂解。在这个浓度范围内,去污剂并不干扰试验的结合部位,但是会适度的增加光密度值。含有triton的样品需利用标准曲线估计浓度,为了较精l确的测定,标准曲线需以相同方式稀释。取1 ml细胞培养上清加入10μl浓---,600g离心力于室温离心,上清液直接用于实验测定分析。
试剂盒组成材料和试剂
1. 羊抗小鼠igg包被的96孔微孔板一张 catalog no.30101
该微孔板将特---识别小鼠igg 的山羊抗l体包被于可拆分酶标条上。
2. camp偶联的辣根---化物酶工作液6 ml catalog no. 30102
本包装含1000×偶联酶储存液和稀释缓冲液。
3. 抗camp的小鼠单克l隆抗l体工作液6 ml catalog no. 26002-2
本包装含1000×抗l体储存液和稀释缓冲液。
注意:为了稳定和长效的实验,抗l体储存于-80℃。在使用前将6μl 1000×偶联酶储存液加入到6 ml 稀释缓冲液中配制为工作液,并轻轻混匀。工作液请避免反复冻融。
4. 中和液6 ml catalog no. 30103
5. 10×浓缩洗涤液15 ml catalog no. 30103
含去污剂的磷酸盐缓冲液。
6. camp标准品0.25 ml catalog no. 30203
浓度5000 pmol/ ml
7. 显色底物a,12 ml catalog no. 30107
8. 显色底物b, 12 ml。 catalog no. 30108
9. 终止液,6 ml; catalog no. 30110
注意:该溶液有腐蚀性;储存时请旋紧瓶盖
纽斯特生物开发出了鼠单克l隆抗l体的camp elisa 检测试剂盒。该单克l隆抗l体对camp的特---比camp、atp等类似的小分子高出108 倍以上。相较于其他的多克l隆抗l体camp试剂盒,纽斯特生物camp elisa试剂盒能---的提高其灵敏性和特---,且能有效避免来自动物多克l隆抗l体的批次间差异, 因此可以提供长久有效地可重复性定量检测。
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