试剂准备
1. 非---化camp标准品
将5000 pmol/ml camp标准品溶液平衡至室温。从#1至#6标记六只洁净试管。移取475μl 0.1m hcl到#1号试管,400μl到#2至#6号试管。加入25μl 5000 pmol/ml camp标准品到#1管中,剧烈涡旋震荡。从#1管中取出100μl溶液至#2管中,涡旋震荡。以此类推,重复上步操作,梯度稀释至#6管。
经以上操作,#1至#6管中camp标准品浓度分别为250,50,10,2,c---antibody,0.4和0.08 pmol/ml(详见camp实验稀释详情键盘纸)。稀释过的标准品需在30分钟内使用。
标记一只试管作为无标准品空白对照(nsb)。移取600μl 0.1m hcl到nsb管中。
2. 洗涤液
将15 ml 10×洗涤液储液加到135 ml去离子水中,稀释成工作液。稀释液可在室温保存至试剂盒有效期限,或者3个月。
本试剂盒所有组分在有效期限内,于4℃稳定保存。为了长效的实验,1000×储液请保存于-80℃。本试剂盒未提供的必需试剂
1. 去离子水或蒸馏水。
2. 浓---。
3. 量程在5μl至1000μl之间的精密移液管。
4. 量程为50μl和200μl的中继移液器。
5. 用于稀释储液的---烧杯。
6. 刻度量筒。
7. 微孔板振荡器。
8. 吸水纸。
9. 酶标l仪,可读波长450nm,在570nm至590nm之间应有修正。
试剂盒组成材料和试剂
1. 羊抗小鼠igg包被的96孔微孔板一张 catalog no.30101
该微孔板将特---识别小鼠igg 的山羊抗l体包被于可拆分酶标条上。
2. camp偶联的辣根---化物酶工作液6 ml catalog no. 30102
本包装含1000×偶联酶储存液和稀释缓冲液。
3. 抗camp的小鼠单克l隆抗l体工作液6 ml catalog no. 26002-2
本包装含1000×抗l体储存液和稀释缓冲液。
注意:为了稳定和长效的实验,抗l体储存于-80℃。在使用前将6μl 1000×偶联酶储存液加入到6 ml 稀释缓冲液中配制为工作液,并轻轻混匀。工作液请避免反复冻融。
4. 中和液6 ml catalog no. 30103
5. 10×浓缩洗涤液15 ml catalog no. 30103
含去污剂的磷酸盐缓冲液。
6. camp标准品0.25 ml catalog no. 30203
浓度5000 pmol/ ml
7. 显色底物a,12 ml catalog no. 30107
8. 显色底物b, 12 ml。 catalog no. 30108
9. 终止液,6 ml; catalog no. 30110
注意:该溶液有腐蚀性;储存时请旋紧瓶盖
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