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包被抗l体(或抗原)的选择:将抗l体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求ph在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的较适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的od值。选择od值较大而蛋白量较少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
进口分装:检测范围和灵敏度不同,用量少时,可使用分装,前期是它的长久性不是---。试剂盒的标准曲线较高点od 值均在2.0±0.2,零孔的od 值都控制在0.10以下。试剂盒的标准曲线相关系数r***0.98。试剂盒重复性好,板内、板间变异系数均<9 %。试剂的组份都多给20%的富余量,---完成48/96孔的检测,避免分次检测可能造成试剂量不足的情况。检测抗l体及酶结合物的稀释度合适(均为1:30), 方便试验操作者准确地做稀释工作,---实验结果的重复性。
elisa的基础是抗原或抗l体的固相化及抗原或抗l体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗l体仍保持其免l疫学活性,酶标记的抗原或抗l体既保留其免l疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗l体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗l体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗l体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗l体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,c--- elisakit,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率---,间接地放大了免l疫反应的结果,使测定方法达到---的敏感度。 elisa可用于测定抗原,也可用于测定抗l体。然而,影响elisa试验结果的因素很多,故加强各个环节的---才能充分发挥其方法学的优点。
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