sar1 蛋白-武汉纽斯特(商家)

电泳和转移

1向聚丙l烯---凝胶（17%）中加入15μl/孔的下拉上清液。而且建议包括预染色mw标准（作为成功转入的指标步骤3）。

2按照制造商的说明进行sds-page。

3按照制造商的说明，将凝胶蛋白转移到pvdf或硝化纤维膜上说明。

免l疫印迹检测（所有步骤均在室温下搅拌）

1在电印迹步骤之后，将pvdf膜浸入100%甲l醇中15次

然后在室温下干燥5分钟。

如果使用---纤维素，则应跳过此步骤。

2室温下用5%脱脂奶粉或3%牛血l清白蛋白在tbst中封闭1小时

不断地搅动。

用抗arl1单克l隆抗l体孵育，新鲜稀释1:50~1000

（取决于样品中arl1蛋白质的含量）5%脱脂奶粉或3%

bsa/tbst，室温下持续搅拌1-2小时或4o

过夜。

3用tbst清洗吸水膜三次，每次5分钟。

4用二级抗l体（例如山羊抗鼠igg，hrp结合物）培养膜，

在室温下，sar1 蛋白，在5%脱脂奶粉或3%bsa/tbst中新鲜稀释1:1000，1小时

不断地搅动。

5用tbst清洗吸水膜三次，每次5分钟。

6使用您选择的检测方法，如ecl。

gα13活化试验。mef细胞分别用lpa（第2道）或不加lpa（1道）处理。细胞裂解物用抗活性gα13单克l隆抗l体（cat）孵育。#26902）（顶面板）。这个用抗gα13兔多克l隆抗l体（cat）免l疫印迹法检测沉淀活性gα13#21005年）。底部的面板显示了用抗gα13的细胞裂解物的western blot（5%在顶部面板中使用的）。