使用前将各种试剂取出放置30分钟，平衡至室温。所有标准品和样品必需设置平行对照实验。
快速加入试剂至样品中，立即漩涡震荡2秒混匀。
1. 依据实验键盘纸决定酶标条的使用量，将剩余的酶标条连同干燥剂一起放回密封塑料袋，密封，4℃保存。
2. 移取50μl中和液至各个微孔中，除了ta(全活性)孔和blank(空白)孔。
3. 移取100μl 0.1m hcl至nsb(非特异结合)孔和b0孔(0 pmol/ml camp标准品)。
4. 移取100μl camp标准品至相应的孔。
5. 移取100μl样品至相应的孔。
6. 移取50μl 0.1m hcl至nsb(非特异结合)孔。7. 移取50μl 偶联酶至各孔中，除了ta(全活性)孔和blank(空白)孔。
8. 移取50μl 抗l体工作液至各孔中，除了ta(全活性)孔、blank(空白)孔和nsb(非特异结合)孔。
9. 将酶标孔置于孔板振动器上，250~500rpm，室温孵育2小时。
10. 在吸水纸上拍干微孔内溶液，加洗涤液400μl每孔洗3次，每次需拍干。
11. 后一次洗涤，清空各微孔，在干净的无尘吸水纸上轻巧酶标板数次，以---没有洗涤液残留。
12. 加5μl 偶联酶至ta(全活性)孔。
13. 每孔200μl显色底物溶液，于室温静置5~30分钟。（显色底物a和b需在临用前15分钟内等体积混合，并避光放置。）
14. 每孔加入50μl终止液。终止后立即读数。
15. 清除酶标l仪blank(空白)孔值，读取450nm处的光密度值，在570nm至590nm之间有修正。如果酶标l仪不能自动清除blank(空白)孔值，那么手动扣除每个读数的blank(空白)孔光密度值。
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固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙l烯、聚---乙l烯、聚丙---和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚---乙l烯凹孔板。不管何种载体，c--- antibody，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否---。
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