体外用gtpγs/gdp处理蛋白以用作阳性和阴性的对照
注意：在细胞体内环境条件下大约有10%的cdc42被激l活，而在体外用gtpγs处理大约有90%的cdc42被激l活。
1. 准备两个离心管，每个管中各加入0.5 ml的细胞提取物（如果是纯的cdc42蛋白则每个管中加入的蛋白量为1ug）。
2. 每个管中加入20ul 0.5m edta(终浓度即为20 mm)。
3. 一个管中加入5ul的100x gtpγs（终浓度即为100 um）作为阳性对照。另一个管中加入5ul的100x gdp（终浓度即为1 mm）作为阴性对照。
4. 将离心管置于30°c条件下反应30min并不断搅动。
5. 终止反应：将管置于冰上并加入32.5ul 1m mgcl2(终浓度即为60mm)。
储存条件
试剂盒的成分在试剂盒的有效期限内必须存放于4°c条件下保存。
试剂（试剂盒内不提供，由实验者自行配置）
1. ---和未---的细胞裂解物；
2. 蛋白酶抑制l剂；
3. 4 °c 摇杆或者摇床；
4. 0.5 m edta (ph 8.0)；
5. 1 m mgcl2；
6. 2x reducing sds-page sample buffer；
7. 电泳和免l疫印迹相关试剂；
8. 免l疫印迹缓冲液tbst (10 mm tris-hcl， ph 7.4， 0.15 m nacl，cdc42-gtp， 0.05%
tween-20)；
9. 免l疫印迹封闭缓冲液 (tbst containing 5% 脱脂奶粉/3% bsa)；
10. pvdf或硝l酸纤维素膜；
11. 二抗；
12. ecl 检测试剂；
小g蛋白是从属于细胞调节因子中的一个超家族。rho家族是小g蛋白中的一个亚家族，它在细胞运动、细胞分裂以及基因转录中发挥主要作用。而本试剂盒中的cdc42就属于rho亚家族中的一种， cdc42参与生理活动过程中其分子结构会呈现出2种相互转换的形式：与gtp结合的激l活状态和与gdp结合的非活性状态。
目前cdc42蛋白活性的检测主要是依据小gtp酶cdc42可以与p21活化激酶（pak）的p21结合区域（pbd）结合，使pak活化从而发挥生物学功能，进而间接的进行cdc42活性l功能的监测。然而此方法在检测过程中存在着一定的局限性比如gtp水解成gdp的速度过快以及cdc42-gtp结合蛋白与p21结合区域之间较低的亲和力，导致这种检测方法的重复性较差。
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